关于干细胞低温保存液的研究

         研究发现，细胞离体后，由于失去了神经和体液的调节，生理、生化代谢环境变更和活动规律变化，以及各种营养物质供应的中断，使它们将逐渐失去活力而死亡。

为了保持离体细胞的活力，延长其寿命，并提供其所需的营养和生活环境，人们模拟体液或胞内液，配制了各种保存液。此外，在低温冷冻前的预处理中，通常在保存液中加入低温保护剂，形成所需的低温保护液浓度。中科博生。

(1)保存液的组成

保存液的组成，因各种细胞、组织和器官的特点的不同而不同，基本上可以分为以下3种。

电解质平衡盐溶液 包括仿胞内型和仿胞外型溶液，这些溶液含有不同浓度的氯化钠、氯化钾、硫酸镁、氯化钙、碳酸氢钠、磷酸二氢钾等，典型的有Ringer's液、Hank's 液、Eargle's 液等。中科博生。

高渗溶液 一般选用葡萄糖、甘露醇、蔗糖等作为高渗剂。如果用于慢速冻存预处理，可以降低溶液的盐浓度；用于快速冻存预处理，则可以使细胞脱水，缓解胞内结冰的不利情况。中科博生。

营养液 含有多种营养物质，如氨基酸、核苷类、葡萄糖等，常用的有TC199、RPML-1640、Eargle's、Hams-F12等。此外，为了防止细菌繁殖，有时需加人抗生素（如青霉素、链霉素、庆大霉素等),有的还加入细胞生长因子、胰岛素、转铁蛋白、胰高血糖素等，用以提高细胞复苏后的存活率。中科博生。

(2)配制保存液时的注意事项

溶液的渗透压 保存液不一定是等渗溶液，但必须接近等渗压，使细胞内|外的渗透压相同或相近，以防细胞因渗透压的改变而发生皱缩或膨胀现象。

溶液的nH 虽然有机体和细胞可以经受其外环境中 pH的较大变化，但是细胞代谢对pH敏感。大多数细胞内代谢发生在PH接近中性的条件下，此时各种代谢和生化反应速度最快。

抗凝剂 分为化学药品和生物制剂两种。化学药品抗凝剂多采用钙结合剂，如 EDTA-2Na的结合力很强，每500ml全血用30ml 1.36%的EDTA-2Na即可；而枸橼酸钠与钙的结合力弱，每 50ml全血仅需2～3g,化学药品抗凝剂、要用于红捆胞和骨髓细胞的保存。生物制剂抗凝剂常用的是肝素，它是通过阳正凝血酶生成而达到抗凝的目的。10mg 肝素可以使100ml血液数天不凝固，主用于白细胞和血小板的分离和保存。中科博生。

(3）用于干细胞冷冻的低温保存液

各种干细胞由于其理化和生物学特性的不同，对于低温保存液的要求也就不同。常用的造血干细胞低温保存液基本成分是TC199或RPMI-1640营养液，可以适当再加入别的营养因子，如胰岛素、牛血清、抗生素等。另外有一些细胞在冻存时，如果在低温保护液中再加人高浓度的牛血白蛋白、转铁蛋白、胰高血糖 素、细胞生长因子、别嘌呤醇等，其效果更佳。